布病抗體檢測試劑盒(試管凝集法)

布病抗體檢測試劑盒(試管凝集法)說明說

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：布病抗體檢測試劑盒(試管凝集法)

【包裝規(guī)格】                        

12ml/瓶

【預期用途】

布病抗體檢測試劑盒(試管凝集法)

本品用于體外定性檢測人血清樣本中布魯氏菌抗體，檢測結(jié)果僅用于科研學術(shù)參考，不能作為臨床診斷依據(jù)。布魯氏菌病是由布魯氏菌屬細菌引起的人畜共患的傳染病。布魯氏菌具有很強的侵襲力和擴散力，當人與牲畜及其污染物接觸過程中，可以經(jīng)過皮膚、消化道、呼吸道黏膜等侵入人體。布魯氏菌抗體的產(chǎn)生始于感染后的2-3周。血液中產(chǎn)生的抗體可反映出感染的發(fā)生及發(fā)展過程，因此檢查血液中布魯氏菌抗體對了解布魯氏菌病的感染、發(fā)病、治愈等具有一定的意義。

布魯氏菌病試管凝集試驗（SAT）是比較穩(wěn)定、特異且較敏感的1種血清學方法，可以檢測人與動物血清中的抗布魯氏菌 IgG、IgM和 IgA三類免疫球蛋白抗體，但主要檢測的是 IgM和 IgG型抗體，且 SAT檢測IgM的敏感性顯著高于IgG，因此可作為人與動物感染布魯氏菌病的早期診斷；同時也可用于布魯氏菌疫苗免疫后機體抗體水平的檢測；若進行多次SAT，血清中凝集價不斷上升則診斷意義更大。在實際應用中SAT常用作布病普查的復檢與確證。

【檢驗原理】

在37℃條件下，適宜濃度的菌體抗原可充分反應結(jié)合血清樣本中布魯氏菌抗體，反應結(jié)束后，根據(jù)其凝集程度可以判定血清樣本中布魯氏菌抗體滴度的高低。

【主要組成成分及性狀】

本品為乳白色液體，長時間靜置后瓶底可見白色沉淀，震搖后為均勻懸浮液。試劑的主要成分是經(jīng)加熱滅活的布魯氏菌牛型 104M株菌體，菌體懸于含 5g/L的生理鹽水中。

【儲存條件及有效期】

于 2～ 8℃下保存，有效期24個月。

試劑反復多次開瓶使用后，6個月內(nèi)試劑性能不發(fā)生變化。  

生產(chǎn)日期、有效期至：見標簽。

【 運 輸 條 件 】                          

2～ 30℃運輸（30℃不超過6天）。

【實驗器具】

1.試驗應使用潔凈且透明度好的試管。

2.試驗使用的吸管或移液器吸頭使用前應*清洗。

【樣本要求】

1.樣本的處理

應采集空腹待檢者的血液不少于1mL，靜置或離心后采集血清。

2.樣本的儲存

血清樣品若在一周內(nèi)進行檢測可儲存在 2～ 8℃條件下；若超過一周之后檢測應將樣本儲存于 -20℃條件下，同時應避免反復凍融。

3.已知的干擾物：

① 患者治療期間，血清中藥物成分會造成部分血清樣本的凝集現(xiàn)象不明顯甚至出現(xiàn)假陰性，可選擇在療程間隔期進行復檢樣本的血清學檢驗。

② 出現(xiàn)明顯溶血、微生物污染的樣本不能用于檢測。

【檢驗方法】

1. 反應于室溫（18～ 25℃）條件下進行，試驗前將試劑、待檢樣本以及試管、吸管等用具應置于室溫下平衡 30分鐘以上。

2. 試劑使用前應充分搖勻。

3. 稀釋液：0.5%生理鹽水。

4. 稀釋抗原液：布氏桿菌病試管凝集試驗抗原用稀釋液作1:10稀釋使用。

5. 準備五支試驗管（以做5個滴度為例），第1試管加入2.3ml生理鹽水，其余試管加入0.5ml生理鹽水。

6. 取0.2ml待檢血清加入第1試管2.3ml生理鹽水內(nèi)，混勻后取0.5ml加入第二試管做1:1稀釋，第二試管混勻后取0.5ml加入第三試管做1:1稀釋，以后各血清稀釋管以此類推，第1管內(nèi)應棄去1.5ml剩余稀釋血清，后一管棄去0.5ml剩余稀釋血清，只留下0.5ml為試驗用。

7. 將稀釋抗原液0.5ml分別加入以上各試驗管，各管內(nèi)待檢血清分別稀釋為1:25,1:50,1:100,1:200,1:400。

8. 陰陽對照試驗管制備：將陰陽對照血清按要求體積稀釋后，操作步驟參照5.6.7。

9. 比濁管制備：取稀釋抗原液1.25ml，再加入等量的稀釋液作倍比(1:1)稀釋，制成稀釋抗原液A(1:20), 再按下表配制比濁管：

++++：*凝集，上層液100％清亮；+++：幾乎*凝集，上層液75％清亮；++：顯著凝集，液體50％清亮；+：有微量凝集，液體25％清亮；-：無凝集，液體不清亮。

10. 孵育：將試驗管，對照管及比濁管充分振蕩后置37℃±l℃溫箱中孵育20-22h，取出室溫靜置2小時，不需搖晃，以比濁管為標準判定結(jié)果。

【檢測結(jié)果的解釋】

根據(jù)各反應管內(nèi)上層液體的清亮度判定結(jié)果。特別是50％清亮度(++)對判定結(jié)果關(guān)系較大，一定要與比濁管對比判定。待檢血清效價在1:100(++)及以上者或病程一年以上滴度1∶50（++）及以上者為陽性。以出現(xiàn)“++"及以上凝集現(xiàn)象的gao血清稀釋度判斷為該血清的抗體滴度.對于檢出的陽性病例在10天～ 14天后進行復檢有利于更準確進行布魯氏菌病的診斷。

【診斷標準】： 布魯氏菌病診斷標準(WS268-2007)。

【產(chǎn)品性能指標】          

抗原凝集效價不低于1:1000（++）。

【檢驗方法的局限性】                                                                              

1、本試劑檢測用樣本為人血清，在樣品保存、使用過程中，應注意因樣本可能存在潛在病原微生物（乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒及 HIV 病毒）等引起感染風險。

2、該試驗作為單一的診斷方法是不完善的，凝集反應陽性時有診斷意義，由于有時會出現(xiàn)前帶及封閉現(xiàn)象即使凝集反應陰性時也不能否定布魯氏菌病，應與虎紅平板凝集實驗（BPAT）、平板凝集實驗（PAT）等結(jié)合使用。

3、該試驗操作較麻煩、費時、費力，不適合于用作大規(guī)模的篩選檢測。另外該方法不能區(qū)分人工免疫和自然感染，并不是所有感染情形都出現(xiàn)具有診斷意義的抗體水平，單獨使用SAT時易造成誤診和漏診。

4、當被檢測血清樣本中布魯氏菌抗體含量超過1000IU/mL時，試驗會出現(xiàn)不同程度的前帶現(xiàn)象。

5、根據(jù)文獻報道及試驗結(jié)果，布魯氏菌與腸炎耶爾辛氏O:9、大腸桿菌O:157、霍亂弧菌、土拉熱弗朗西斯菌存在共同抗原，注意在檢測過程中可能出現(xiàn)的交叉反應，應對此予以鑒別。

【注意事項】                                                                                      

1.嚴格按說明書進行操作，準確加樣并保證試驗的溫度條件，低溫條件下反應的靈敏度會降低；按要求的時間及時觀察，以免影響結(jié)果的判定。建議每次檢測時進行陽性及陰性對照實驗，只有在對照實驗成立的前提下，檢測結(jié)果才有意義。

2.試劑使用完后立即擰緊瓶蓋，于 2～ 8℃下避光保存，嚴禁凍存。

3.試劑使用前應充分搖勻；應在有效期內(nèi)使用，若瓶內(nèi)出現(xiàn)顆?；驌u振不散的凝塊時切勿使用。

4.試劑含有及其它腐蝕性化學成份，接觸或吞食對人體可造成危險！一旦接觸到皮膚應立即用大量的水進行沖洗，必要時需到醫(yī)院就診。

5.試驗過程中按照實驗室規(guī)定采取必要的安全防護措施。

6.樣品、洗滌液、廢棄物和試驗用具都視同有傳染性的物品，請遵循國家和地方的相應法規(guī)和要求，采用安全和可接受的方法對所有材料進行處理。

7.本品作為科研試劑，檢測結(jié)果僅用于科研學術(shù)交流，不能作為臨床診斷依據(jù)。